@MASTERSTHESIS{ 2024:1460141815,
 	title = {Avaliação da produção de peptídeos antifúngicos (PAFs) expressos por fungos do gênero penicillium e aspergillus},
 	year = {2024},
 	url = "https://tede.unioeste.br/handle/tede/7479",
 	abstract = "O surgimento de novas doenças fúngicas tornou-se um problema de saúde
 pública mundial. Nos últimos anos tem se acelerado a busca por novas fontes
 de bioativos capazes de serem aplicados contra fungos patogênicos aos
 humanos e para o controle de fitopatógenos. Nesse contexto, os peptídeos
 antifúngicos (PAFs) são moléculas estáveis e considerados promissores como
 novos antifúngicos eficazes para atacar fungos resistentes aos antifúngicos
 atuais. Os fungos para o estudo foram selecionados com base em avaliação da
 literatura e de bases de dados genômicos. Foram selecionados o fungo
 Penicillium expansum, Penicillium citrinum e Aspergillus flavus que são
 reportados como produtores de PAFs. Os fungos foram identificados por
 sequenciamento da região gênica do DNA ribossomal por amplificação com PCR
 convencional usando os primers descritos na literatura ITS1 e ITS4. O DNA
 genômico dos fungos foi extraído e purificado com Fenol-clorofórmio, e após
 quantificação e visualização da integridade do DNA genômico em gel de agarose
 foi realizado a PCR em nosso laboratório e sequenciamento pela empresa
 Ludwig Biotecnologia. As sequências obtidas foram analisadas pelo BLASTn e
 após a identificação dos fungos por análise filogenética, as sequências foram
 depositadas no GenBank. Um peptídeo antifúngico hipotético de Aspergillus
 flavus foi encontrado na base Ensembl fungi e primers foram desenhados com a
 ferramenta OligoAnalyzer (Integrated DNA Technologies-IDT) para amplificar o
 gene deste PAF. A estrutura tridimensional do peptídeo antifúngico foi
 inicialmente modelada utilizando modelos do banco de dados Swiss-Model.
 Foram sintetizados primers para 3 classes de PAFs já descritos na literatura e
 estes primers foram inicialmente utilizados na PCR com o DNA genômico do
 fungo P. citrinum para otimização da reação. Nesta reação a amplificação em P.
 expansum, P. citrinum e A. flavus, no entanto os amplicons sequenciados não
 corresponderam aos genes de PAFs. Os fungos foram cultivados em meio
 líquido com agitação e estacionário como descrito na literatura. Testes de
 atividade antifúngica em placas de 96 poços foram realizados utilizando
 amostras de extrato do cultivo purificados por cromatografia de exclusão de
 molecular. Foi verificada a sensibilidade do fungo Aspergillus niger aos extratos
 produzidos por P. citrinum e A. flavus em placas de cultura, revelando que as
 amostras de P. citrinum A2 e A. flavus foram A1, A2, A5, A6, G1, G6, G7, H1,
 H4, H5 e H8 apresentaram atividade antifúngica. As frações do extrato purificado
 do cultivo líquido foram dosadas e submetidas a eletroforese em Tricina SDSPAGE 16% revelando a presença de peptídeos, entretanto estes não foram
 caracterizados neste trabalho, abrindo novas perspectivas para a caracterização
 bioquímica dos peptídeos presentes nos extratos.",
 	publisher = {Universidade Estadual do Oeste do Paraná},
 	scholl = {Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas},
 	note = {Centro de Ciências Médicas e Farmacêuticas}
}