@MASTERSTHESIS{ 2022:90537142, title = {QUITINASE DE Thermothelomyces heterothallicus PA2S4T: PURIFICAÇÃO, CARACTERIZAÇÃO BIOQUÍMICA E APLICAÇÃO BIOTECNOLÓGICA}, year = {2022}, url = "https://tede.unioeste.br/handle/tede/6437", abstract = "As quitinases são enzimas responsáveis por degradarem a quitina, um polímero insolúvel presente no exoesqueleto de insetos, em fungos, leveduras, algas e crustáceos. São inúmeros os organismos que produzem essas enzimas, sendo os fungos as principais fontes de obtenção. Elas são utilizadas em diversas áreas pela indústria, como na composição de defensivos agrícolas, em produtos farmacêuticos, como conservante e como adjuvante na terapia com medicamentos antifúngicos. Além disso, os quitooligossacarídeos (QOS), produtos gerados após a hidrólise da quitina, possuem diferentes atividades biológicas, como antimicrobiana e prebiótica. Assim, este estudo teve por objetivo purificar e caracterizar bioquimicamente a quitinase extracelular do fungo Thermothelomyces heterothallicus PA2S4T, bem como avaliar sua aplicação em diferentes metodologias biotecnológicas. A quitinase extracelular purificada parcialmente apresentou massa molecular de 120 kDa e, após análise do zimograma e características bioquímicas, constatou-se uma β-N acetilglicosaminidase (GlcNAcase). A GlcNAcase apresentou maior atividade em temperatura de 65 ºC e pH 6,0, sendo estável em temperaturas entre 40 e 55 ºC e na faixa de pH 6,0 a 6,5. Os álcoois etílico, isobutílico, isopropílico e o glicerol aumentaram a atividade enzimática, enquanto o HgCl2 e FeCl2 a 5 mmol/L inibiram totalmente. A GlcNAcase apresentou atividade catalítica elevada com os substratos p-nitrofenil N-acetil-β-D-glicosaminídeo e p-nitrofenil β-D-glicopiranosídeo e nenhuma atividade na presença de quitina coloidal. Os valores de Vmáx, Km, kcat, kcat/Km e Ea foram 971,81 µmol/mL/min, 0,14 mg/mL, 1962,4 s-1 , 4867,06 mM/s e 43,92 kJ/mol, respectivamente. A análise das imagens obtidas por microscopia eletrônica de varredura (MEV) indicaram que a bioconversão da casca de camarão in natura foi efetiva e não é necessário o emprego de pré-tratamento para que a degradação seja exitosa. Após análise dos produtos obtidos, verificou-se a produção de N acetilglicosamina (GlcNAc) e de QOS com maiores graus de polimerização (GP), possivelmente diacetilquitobiose e quitotriose, indicando que o extrato bruto de T. heterothallicus PA2S4T pode conter dois tipos de quitinases: uma endoquitinase ou quitobiase e uma GlcNAcase. Além disso, os QOS obtidos apresentaram um efeito prebiótico sobre o crescimento de Lactobacillus paracasei superior ao da glicose. As características apresentadas pelas quitinases deste estudo e pelos produtos da sua hidrólise evidenciam o grande potencial para a utilização destes pela indústria biotecnológica.", publisher = {Universidade Estadual do Oeste do Paraná}, scholl = {Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas}, note = {Centro de Ciências Médicas e Farmacêuticas} }