@MASTERSTHESIS{ 2019:845752014,
 	title = {Isolamento e sequenciamento do gene PcAFP codificante para peptídeo antifúngico de Penicillium crustosum},
 	year = {2019},
 	url = "http://tede.unioeste.br/handle/tede/4603",
 	abstract = "Infecções fúngicas vêm aumentando significativamente em todo o mundo, devido à incidência de doenças infecciosas graves que debilitam principalmente pacientes imunocomprometidos. Em virtude da elevada resistência aos medicamentos antifúngicos em uso, novas moléculas estão tornando-se alvo de pesquisas. Enquadram-se nessas os chamados peptídeos antifúngicos. Esses são estudados por causa de sua capacidade de atingir as células alvo sem danificar o organismo hospedeiro. Assim, este estudo investigou a presença do peptídeo antifúngico no Penicillium crustosum utilizando como referência a sequência homóloga do gene PgAFP de Penicillium chrysogenum. Ao aplicar técnicas de biologia molecular, o gene homólogo PgAFP de P. crustosum foi obtido e sequenciado, bem como o peptídeo foi isolado, a partir do crescimento do fungo em meio de cultivo líquido estressante para expressão do peptídeo. O gene foi amplificado através da técnica de PCR convencional, na qual foram desenhados oligonucleotídeos (primers) específicos para o gene PgAFP. A sequência completa do gene PcAFP de 405 pb foi obtida com primers desenhados na região a montante e a jusante do gene PgAFP. A sequência genômica foi comparada com sequências depositadas no banco de dados do NCBI com a ferramenta Blastn. Após essa ação, o gene mostrou 96,30% de identidade ao gene PgAFP do P. chrysogenum. A comparação da sequência completa do gene PcAFP com o PgAFP permitiu revelar uma região de 279 pb codificante para o peptídeo antifúngico. Esta sequência foi traduzida em sua sequência de aminoácidos, comparada ao modelo do peptídeo antifúngico PgAFP do P. chrysogenum e demonstrou homologia de 98.28% com esse. A modelagem do PcAFP revelou o peptídeo sinal conservado da família das proteínas antifúngicas, estrutura tridimensional conservada com 3 pontes dissulfeto e domínio conservado -core encontrado nas PAFs. O peptídeo foi analisado com a ferramenta para previsão do pI/Mw, que indicou massa molecular de 6,48 kDa e pI 8,83. O extrato obtido a partir do sobrenadante do meio de cultura AFPIM mostrou um peptídeo de 6,9 kDa em gel de poliacrilamida Tricina SDS-PAGE 16%, contudo, ainda não conclusivo quanto ao peptídeo de P. crustosum. O extrato bruto extracelular do cultivo líquido foi testado quanto à atividade antimicrobiana contra bactérias e levedura. No ensaio de microdiluição em caldo, os microrganismos foram expostos a diferentes diluições do extrato extracelular contendo o peptídeo. Nesse, obteve-se atividade inibitória contra Staphylococcus aureus e Candida albicans. Em síntese, ao concluir o isolamento desse peptídeo em P. crustosum contribuiremos com a caracterização de um novo peptídeo antifúngico com potencial para aplicação na saúde, além de aumentar o conhecimento sobre a estrutura e função dessas moléculas bioativas.",
 	publisher = {Universidade Estadual do Oeste do Paraná},
 	scholl = {Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas},
 	note = {Centro de Ciências Médicas e Farmacêuticas}
}