@MASTERSTHESIS{ 2019:668818458,
 	title = {Prolactina aumenta a expressão de enzimas antioxidantes e ativa o receptor ativado por proliferador de peroxissoma (ppar) em células INS- 1E},
 	year = {2019},
 	url = "http://tede.unioeste.br/handle/tede/4318",
 	abstract = "O diabetes mellitus (tipos 1 e 2) é caracterizado pela morte de células beta
 pancreáticas, a qual é induzida, entre outros fatores, pelo estresse oxidativo (EO).
 Sabe-se que a prolactina (PRL) melhora a sobrevivência de células beta frente a essa
 condição; entretanto, o mecanismo pelo qual isso ocorre ainda é desconhecido. Uma
 vez que a PRL modula a expressão gênica de enzimas antioxidantes em diferentes
 tipos celulares, nesta pesquisa investigamos se a PRL protege as células beta
 pancreáticas do estresse oxidativo por aumentar a produção de enzimas antioxidantes
 e quais vias de sinalização estariam envolvidas nesse efeito. Para isso, utilizamos
 células de insulinoma de rato da linhagem INS-1E. As células foram pré-tratadas por
 24h com veículo (0,3 mmol/L de NaHCO3 + 0,3% de BSA) ou PRL (0,5 μg/mL), seguido
 da indução do estresse oxidativo com peróxido de hidrogênio (H2O2) para avaliação da
 viabilidade celular, produção mitocondrial de espécies reativas de oxigênio (EROs) e
 conteúdo proteico das enzimas antioxidantes catalase (CAT), glutationa peroxidase 1
 (GPx1), superóxido dismutase 1 (SOD1) e superóxido dismutase 2 (SOD2). O
 conteúdo proteico dessas enzimas também foi avaliado no experimento de timecourse,
 no qual as células foram tratadas com PRL (0,5 μg/mL) em diferentes tempos.
 Fisiologicamente, durante a prenhes/gravidez ocorre acentuada secreção hipofisária
 de PRL. Por isso, com o objetivo de elencarmos possíveis vias de sinalização a serem
 investigadas, nosso próximo passo foi realizar análises de bioinformática com os genes
 upregulated em ilhotas de ratas prenhas, identificados previamente por nosso grupo de
 pesquisa a partir de macroarray. Os achados dessas análises levaram-nos à realização
 do ensaio de promotor repórter utilizando diferentes concentrações de PRL por 24h.
 Por fim, para testar se os efeitos da PRL são mediados pela via de sinalização sugerida
 pelas análises de bioinformática, avaliamos novamente a viabilidade celular na
 presença de siRNA para knockdown do gene alvo. As análises estatísticas foram feitas
 por teste t ou ANOVA seguida do pós-teste de Bonferroni. A PRL aumentou a
 sobrevivência das células beta pancreáticas expostas a H2O2, assim como o conteúdo
 proteico da SOD2 e da CAT. Também observamos a diminuição da concentração
 mitocondrial de H2O2 em células pré-tratadas com o hormônio. As análises de
 bioinformática revelaram enriquecimento da via do receptor ativado por proliferadores
 de peroxissoma (PPAR), o qual está envolvido na transcrição de enzimas
 antioxidantes. Com o ensaio de promotor repórter observamos que PRL ativa PPAR.
 Dentre as isoformas de PPAR existentes, avaliamos se PRL seria dependente de
 PPARy para evitar a morte celular causada pelo EO, uma vez que a expressão de
 PPARγ é aumentada pela PRL em linhagem celular de pré-adipócitos e no tecido
 adiposo de ratos. No entanto, o knockdown desse fator de transcrição não alterou a
 eficiência da PRL em proteger as células beta da morte causada pelo H2O2.
 Concluímos que a PRL aumenta a expressão de enzimas antioxidantes e essa ação
 parece ser independente de PPARγ. Investigações futuras são necessárias para
 identificar a via de sinalização que medeia esse efeito.",
 	publisher = {Universidade Estadual do Oeste do Paraná},
 	scholl = {Programa de Pós-Graduação em Biociências e Saúde},
 	note = {Centro de Ciências Biológicas e da Saúde}
}