@MASTERSTHESIS{ 2017:1400978697,
 	title = {Deleção parcial do fator de transcrição ACE1 para otimização da produção de celulases por trichoderma reesei RUT-C30},
 	year = {2017},
 	url = "http://tede.unioeste.br/handle/tede/2954",
 	abstract = "O bioetanol de segunda geração emprega materiais lignocelulósicos na sua
 elaboração. Uma das etapas para a degradação destes materiais utiliza celulases
 produzidas por microrganismos. Dentre estes, o fungo Trichoderma reesei é um dos
 principais produtores de celulases utilizadas na indústria. A modificação genética
 deste fungo pode levar à otimização da produção de suas enzimas, diminuindo o custo
 e melhorando a fabricação de biocombustíveis. Desta forma, o objetivo do trabalho foi
 deletar a região dos motivos dedos de zinco no gene que codifica o fator de transcrição
 repressor de celulase ACE1 do fungo T. reesei RUT-C30, buscando a otimização na
 produção enzimática. Na construção dos primers para amplificação das regiões 5’ e
 3’ de ace1 e do marcador de seleção hph, que confere resistência à higromicina B,
 utilizou-se o site Joint Genome Institute – JGI e o programa BioEdit®. A construção do
 cassete de deleção com o vetor pRS426 foi mediado pela levedura Saccharomyces
 cerevisiae SC9721. Posteriormente, a construção do cassete, a transformação de T.
 reesei RUT-C30 foi realizada através de protoplasto e a confirmação desta
 transformação foi efetuada por amplificação de parte do hph utilizando os primers
 hphNestF e hphNestR. Após a transformação, com os mutantes obtidos, a atividade
 de endoglucanase, exoglucanase e celulase total foi quantificada com os substratos
 carboximetilcelulose (CMC), celulose microcristalina (Avicel®) e papel de filtro
 Whatman (PF), respectivamente. A produção enzimática e a eficiência na hidrólise da
 biomassa foram realizadas comparando-se a linhagem RUT-C30 aos mutantes. Após
 a construção do cassete de deleção, a amplificação de um fragmento de 3501 pb
 confirmou a formação do cassete. E, posteriormente à transformação da linhagem
 RUT-C30, o amplificado de 989 pb foi observado, confirmando a deleção da sequência
 alvo em 3 mutantes. Com o ensaio de atividade de celulases, as 3 linhagens
 transformadas mostraram maior produção enzimática quando comparadas à linhagem
 RUT-C30. Nessa comparação, foi observada diferença estatística significativa da
 linhagem RUT-C30Δace1-1 com Avicel® e PF (p<0,001), da linhagem RUTC30Δace1-
 2 com CMC (p<0,01) e PF (p<0,05) e da linhagem RUT-C30Δace1-3 com
 Avicel (p<0,001), CMC e PF (p<0,01). Os mutantes também apresentaram maior
 eficiência na hidrólise da biomassa, com aumento na liberação de açúcar entre 21 e
 42%. Com base nos dados deste estudo, os mutantes apresentam-se promissores
 para a produção mais eficiente e viável de etanol. Apesar disso, testes adicionais
 devem ser realizados para melhor entendimento da aplicabilidade destes fungos a
 nível industrial.",
 	publisher = {Universidade Estadual do Oeste do Paraná},
 	scholl = {Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas},
 	note = {Centro de Ciências Médicas e Farmacêuticas}
}